1、PCR實(shí)驗(yàn)一定要保管好試劑,防止交叉污染,尤其是ddH2O2的交叉使用,極易引起污染。
2、NA處理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上,所有緩沖液吸頭、離心管等用前必須高壓處理,常規(guī)消耗用品用后作一次性處理,避免反復(fù)使用造成污染。
3、PCR在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行,操作前后紫外燈消毒。
4、超凈臺(tái)內(nèi)設(shè)內(nèi)供PCR用微量離心機(jī)、一次性手套、整套移液器和其它必須品;移液品用一次性吸頭和活塞的正向排液器,防止移液器基部污染。
5、PCR操作應(yīng)戴手套并勤于更換。成套試劑,小量分裝,專一保存,防止它用。配制試劑用新器具,用后作一次性處理。
6、試劑管用前先瞬時(shí)離心(10s),使液體沉于管底,減少污染手套與加樣器機(jī)會(huì)。
7、最后加模板DNA(包括在石蠟油后),馬上蓋好,混勻,瞬時(shí)離心(10s),使水相與有機(jī)相分開。加入模板且忌噴霧污染,所有非即用管都應(yīng)蓋嚴(yán)。加模板DNA后應(yīng)更換手套。
8、引物稀釋時(shí),要首先瞬時(shí)離心,以避免粉末狀引物在開蓋時(shí)彈出管外。
9、實(shí)驗(yàn)設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。