PCR技術(shù)對于分子診斷有什么貢獻(xiàn)？

3226225110 2021-11-12 10:41

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  qkoufu0199

  2021-11-12 10:51
  
  聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)可對特定基因進(jìn)行擴(kuò)增,因此被廣泛應(yīng)用于獲取特定基因或基因片段及臨床基因診斷等領(lǐng)域.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)發(fā)明至今已近20年了,近年來出現(xiàn)的熒光定量PCR實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,它以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)成為了分子生物學(xué)研究中的重要工具.實(shí)時(shí)熒光PCR作為新一代分子生物學(xué)研究工具，已成為分子診斷、臨床檢驗(yàn)以及基礎(chǔ)生物醫(yī)學(xué)研究的主流技術(shù)平臺(tái)，廣泛應(yīng)用于傳染病、腫瘤、遺傳病、心血管等疾病的分子診斷。
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  wujiani123

  2021-11-12 11:00
  
  分子診斷是當(dāng)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要前沿領(lǐng)域之一，其核心技術(shù)是基因診斷，常規(guī)技術(shù)包括：
  （1）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）；
  （2）DNA測序（DNA sequencing）；
  （3）熒光原位雜交技術(shù)（FISH）；
  （4）DNA印跡技術(shù)（ DNA blotting ）；
  （5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；
  （6）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）；
  （7）基因芯片技術(shù)（gene chip）。
  PCR產(chǎn)品靈敏度高、特異性強(qiáng)、診斷窗口期短，可進(jìn)行定性、定量檢測，可廣泛用于肝炎、性病、肺感染性疾病、優(yōu)生優(yōu)育、遺傳病基因、腫瘤等，填補(bǔ)了早期免疫檢測窗口期的檢測空白，為早期診斷、早期治療、安全用血提供了有效的幫助。
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  草成2012

  2021-11-12 11:00
  
  聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種基礎(chǔ)技術(shù)，對于分子診斷我覺得是具有決定性的，沒有PCR，分子診斷也不知從何說起，PCR為分子診斷提供了技術(shù)和理論支持，其特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快，分子診斷需要的就是吸收這些優(yōu)良特點(diǎn)，加以改進(jìn)應(yīng)用
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  kev****62

  2021-11-12 11:04
  
  PCR技術(shù)在分子診斷上的應(yīng)用：
  1）感染性疾病的分子診斷
  定性或定量的檢測致病微生物的核酸，已經(jīng)用于病毒、細(xì)菌和寄生蟲感染的診斷。
  2）單基因遺傳性疾病的基因診斷
  3）多基因病的相關(guān)基因的診斷
  4）腫瘤相關(guān)基因的分子診斷、
  5）移植配型和法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用
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  M33****7602

  2021-11-12 11:05
  
  感謝 @youyuxing188 的邀請。
  
  我個(gè)人認(rèn)為，PCR對于分子診斷的貢獻(xiàn)才剛剛開始，這是因?yàn)椋?br />我們目前對于PCR反應(yīng)的認(rèn)識(shí)比較粗狂，PCR實(shí)驗(yàn)還做不到如同控制計(jì)算機(jī)一樣精確。對于PCR反應(yīng)中背景DNA、陽離子、陰離子以及各種二級結(jié)構(gòu)中間體如何影響PCR反應(yīng)的了解還處于黑匣子階段，更不要說精確預(yù)測和控制。好在當(dāng)前各種組學(xué)、結(jié)構(gòu)等方面的發(fā)展較為迅速，為我們深刻理解PCR反應(yīng)的精細(xì)過程提供了可能。PCR變種技術(shù)將發(fā)揮更大作用。實(shí)時(shí)定量PCR目前應(yīng)用較為廣泛，數(shù)字PCR的定量能力讓人嘆服，ARMS的對突變檢測高選擇性，結(jié)合了二代測序的高通量多重PCR，LAMP的便捷等，不同變種有不同的長處，可以預(yù)見，將有更多地變種技術(shù)發(fā)展出來。PCR結(jié)果鑒定技術(shù)也在快速發(fā)展之中。經(jīng)典的凝膠電泳，熒光，分辨率極高的毛細(xì)管電泳，還有二代測序等技術(shù)也將極大提高PCR技術(shù)的應(yīng)用范圍和深度。
  
  PCR在理論與技術(shù)層面都需要更多地研究和實(shí)踐，一直以來在實(shí)踐方面做的倒是很多，但在理論分析方面可能因?yàn)椴皇茄芯繜衢T，發(fā)不了大文章，鮮有人從事這一領(lǐng)域。
  
  個(gè)人拙見，拋磚引玉。
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  u_104613656

  2021-11-12 11:14
  
  分子診斷是當(dāng)代醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要前沿領(lǐng)域之一，其核心技術(shù)是基因診斷，常規(guī)技術(shù)包括：
  （1）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）；
  （2）DNA測序（DNA sequencing）；
  （3）熒光原位雜交技術(shù)（FISH）；
  （4）DNA印跡技術(shù)（ DNA blotting ）；
  （5）單核苷酸多態(tài)性（SNP）；
  （6）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）；
  （7）基因芯片技術(shù)（gene chip）。
  分子診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。
  1.核酸分子雜交技術(shù) 具有一定互補(bǔ)序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補(bǔ)配對原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程，稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對特定DNA或RNA序列進(jìn)行定性或定量檢測。
  2.聚合酶鏈反應(yīng)（即Polymerase chain reaction，PCR）[3] 原理：PCR是模板DNA，引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸（dNTP）在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應(yīng)，擴(kuò)增出所需目的DNA。包括三個(gè)基本步驟：雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈（變性）；在低溫下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對（退火）；在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。
  3.生物芯片技術(shù)是近年發(fā)展起來的分子生物學(xué)與微電子技術(shù)相結(jié)合的核酸分析檢測技術(shù)。最初的生物芯片技術(shù)主要目標(biāo)是用于DNA序列測定、基因表達(dá)譜鑒定和基因突變體檢測和分析，所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術(shù)。由于目前這一技術(shù)已擴(kuò)展至免疫反應(yīng)、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域，出現(xiàn)了蛋白質(zhì)芯片、免疫芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片等，所以改稱生物芯片技術(shù)更符合發(fā)展趨勢。
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