PCR中如何計算引物的Tm值？

健康 未結(jié) 3 721
青衫人依舊
青衫人依舊 2021-08-12 03:32
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3條回答
  • 2021-08-12 04:07

    直接計算 ?=2（A+T）+4(G+C)
    或是用軟件來計算 公式計算的肯定沒問題的
    0 討論(0)
  • 2021-08-12 04:12

    常用的公式是Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)，基本還是很準確的，另外你在訂購引物的時候，會有引物合成單的，上面也會標(biāo)明引物的Tm的，上面的更為準確的。
    0 討論(0)
  • 2021-08-12 04:13

    使用最鄰近法并結(jié)合 SantaLucia 1998 熱力學(xué)參數(shù)表和 Schildkraut 1965鹽濃度校正公式所預(yù)測的Tm值最接近實測數(shù)據(jù)。最鄰近法是最準確的Tm值預(yù)測方法，而且當(dāng)PCR引物的GC含量越接近于50%時,其預(yù)測準確率越高。
    張艷春_2011_DNA解鏈溫度_Tm_不同預(yù)測方法的比較.pdf

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Tm值就是DNA熔解溫度，指把DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)降解一半時的溫度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比關(guān)系。引物設(shè)計軟件都可以給出Tm，引物長度，堿基組成，引物使用緩沖的離子強度有關(guān)。
長度為25mer以下的引物，Tm計算公式為：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)
對于更長的寡聚核苷酸，Tm計算公式為：
Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size
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